陸生念珠藻(Nostoc commune)萃取物成分分析及生物活性之研究
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源自藻類的萃取物及成分,經過妥善的加工,可以作為醫學及美妝保養品之原料來源。
陸生念珠藻(Nostoc commune)是一種臺灣的原生藍綠藻,其藻體外覆豐富膠質, ...
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源自藻類的萃取物及成分,經過妥善的加工,可以作為醫學及美妝保養品之原料來源。
陸生念珠藻(Nostoccommune)是一種臺灣的原生藍綠藻,其藻體外覆豐富膠質,含有蛋白質、葉綠素、多醣體、礦物質等多種營養素,被認為是有益健康的天然食材。
過往的研究顯示陸生念珠藻之多醣萃取物含有抗氧化、抗菌及免疫調節等功能,具有應用於醫藥及美妝化妝品產業的潛力。
本研究將對臺灣陸生念珠藻進行一般成分分析,並對透過熱水萃取得到的陸生念珠藻萃取物做更精密的成分分析,再進一步研究陸生念珠藻萃取物對體外細胞株分泌膠原蛋白的影響及抑制發炎表現,評估作為未來應用於醫藥及化妝品產業原料的可行性。
本研究檢測陸生念珠藻藻體之成分組成,結果顯示其碳水化合物為50.42±0.57%、粗蛋白質含量為26.51±0.35%、水分為11.61±0.19%、灰分含有11.31±0.02%、粗纖維為1.44±0.44%及粗脂質為0.14±0.10%。
另外,金屬離子含量檢測的結果顯示,陸生念珠藻新鮮藻體及其萃取物之金屬離子含量分別為鈣離子9111.68及84013.84mgKg-1、鎂離子500.19及8757.78mgKg-1、鉀離子108.5及5479.61mgKg-1、鐵離子53.36及400.19mgKg-1和鈉離子33.19及1514.9mgKg-1。
而陸生念珠藻萃取物之抗氧化成分分析結果顯示每克萃取物之多醣含量為221.69±25.56mg、多酚含量為0.37±0.08mg、類黃酮含量為2.93±1.55mg及硫酸根含量為156.11±3.04mg。
此外,進一步分析陸生念珠藻萃取物之單醣組成,包括:葡萄糖(73.2%)、半乳糖(20.9%)及木糖(3.9%)等。
為了研究陸生念珠藻萃取物對細胞生理活性的影響,進行陸生念珠藻萃取物與體外細胞共培養試驗,結果顯示陸生念珠藻萃取物濃度在10mgmL-1以下對小鼠纖維母細胞株NIH-3T3不會對細胞造成毒性。
在人類皮膚纖維母細胞株CCD-966SK膠原蛋白表現量試驗中,萃取物濃度1mgmL-1培養細胞48小時,胞內第一型膠原蛋白表現量相較於控制組增加1.33倍,第三型膠原蛋白增加1.49倍。
細胞外分泌膠原蛋白含量檢測結果顯示,經陸生念珠藻萃取物濃度1mgmL-1刺激細胞48小時後,第一型膠原蛋白分泌量可從未處理之控制組基礎量0.96提升至1.72ngmL-1,第三型膠原蛋白分泌量可從控制組23.53提升至25.04ngmL-1。
經10mgmL-1陸生念珠藻萃取物處理後,可抑制受脂多醣(LPS)刺激小鼠巨噬細胞株RAW264.7而產生的發炎因子IL-6。
陸生念珠藻萃取物含有豐富的生物活性成分,並可促進細胞胞內及胞外第一型及第三型膠原蛋白表現量增加,還具有抑制IL-6發炎因子的產生,極具應用於醫藥及美妝品原料之潛力。
Algalresourceshavebeenrecognizedfortheirarrayofbiologicallyactivesubstanceswhichcanbeusedtoinducehealthandcosmeceuticalproductdevelopment.AmongtheseisNostoccommune,terrestrialcyanobacteria(blue-greenalgae),nativeinTaiwanwhicharerich-sourcesofnaturalcompounds(proteins,chlorophyll,polysaccharides,andminerals,etc.).Thepolysaccharideextractscompositioncontainshighlybioactivesubstancesthatmayhaveantioxidant,antibacterial,andimmunomodulationthatcouldfightagainstoxidativestressandhenceskinaging.Theapplicationoftheactionsofmicroalgaetomaintainskinhealthisalreadyestablished,however,thescientificrationalefortheirefficiencyhasnotyetbeenstudiedenough.Inthisstudy,preliminaryanalysisonthefreshalgaewasanalyzedforproximatecomposition,mineralandmetalcontents.Phytocomplexbiologicalpropertieswasfurtheranalyzedusingcrudeextracts.ThisstudyaimstoevaluatetheinvitroactivitiesoftheextractfromN.communeifitstimulatesskincollagensynthesisinskincellsandinhibitionofinflammation.ResultsshowedinthepreliminaryexperimentsthattheproximatecompositionoffreshN.communecontentincarbohydrate,crudeprotein,moisture,ash,crudefiber,andcrudelipidwasasfollows:50.42±0.57%,26.51±0.35%,11.61±0.19%,11.31±0.02%,1.44±0.44%,and0.14±0.10%,respectively.Metalandmineralcontentsofthealgaeandextractwerefoundtoberichincalcium(9111.68,84013.84mgKg-1),magnesium(500.19,8757.78mgKg-1),potassium(108.5,5479.61mgKg-1),iron(53.36,400.19mgKg-1),andsodium(33.19,1514.9mgKg-1).Crudeextractsshowedahighpolysaccharidecontentwith221.69±25.56mg,totalphenolcontent(TPC)valueof0.37±0.08mg,flavonoidcontentof2.93±1.55mg,andsulfatecontentof156.11±3.04mgpergramofextract.Moreover,thecompositionofthemonosaccharidemostlyconsistedofglucose,galactose,xylose,andothers.Theinvitrocellularactivitiesofthecrudeextractswereexaminedusingskincellstoassessenhancedbiologicalactivitiesofextractsbyinducingskincollagenproductiontobetterunderstandthemodeofactionwhenappliedasapotentialbioactiveingredienttobeincludedinacosmeticproduct.Theresultshowsthatnon-cytotoxicityinmurinefibroblastNIH-3T3cellsincubatedwith0-10mgmL-1ofN.communeextractfor48hours.Intermsofcollagenproduction,N.communeextractwith1mgmL-1wasfoundtostimulatethesynthesisoftypeIandIIIcollagenfor48hoursinhumanfibroblastCCD-966SKcellsasdeterminedbywesternblot.AswellasinCCD-966SKcellsculturemedium.TypeIcollagenincreasedwithvaluesof0.96(control)to1.72ngmL-1,typeIIIcollagenincreasedwithvaluesof23.53(control)to25.04ngmL-1for48hourswhenanalyzedusingELISAkit.Furthermore,whenmurinemacrophageRAW264.7cellswerepretreatedwithactivatedlipopolysaccharide(LPS)ofN.communeextract,asecretionofpro-inflammatorycytokinesinterleukin-6(IL)-6wassignificantlyrepressed.TheresultssuggeststhatN.communeextractestablishedthepotentialvalueinthedevelopmentofcosmeceuticalsformaintainingskinhealth.
摘要IAbstractII目錄IV圖目錄VII表目錄VIII附錄IX第一章前言1第二章文獻回顧21.陸生念珠藻之生物特性21.1陸生念珠藻化學及營養成分之特性31.2陸生念珠藻環境之應用41.3陸生念珠藻蛋白質成分之應用41.4陸生念珠藻多酚及類黃酮之應用51.5陸生念珠藻多醣之應用51.6陸生念珠藻成分在皮膚照護的應用62.人體皮膚與膠原蛋白合成72.1真皮層之結構72.2膠原蛋白72.3膠原蛋白之合成83.細胞激素Interleukin-6與發炎9第三章材料與方法101.實驗設計102.陸生念珠藻藻體一般成分分析112.1陸生念珠藻藻體來源112.2陸生念珠藻藻體前處理112.3陸生念珠藻藻體粗蛋白質分析112.4陸生念珠藻藻體粗脂質分析122.5陸生念珠藻藻體粗纖維分析122.6陸生念珠藻藻體水分分析132.7陸生念珠藻藻體灰分分析132.8陸生念珠藻藻體碳水化合物分析143.陸生念珠藻萃取物之分析143.1陸生念珠藻萃取物之製備143.2陸生念珠藻萃取物之總醣含量測定143.3陸生念珠藻萃取物之總酚含量測定143.4陸生念珠藻萃取物之類黃酮含量測定153.5陸生念珠藻萃取物之硫酸根含量測定153.6陸生念珠藻萃取物之單醣分析154.陸生念珠藻藻體及萃取物之金屬離子分析155.陸生念珠藻萃取物之細胞生理活性試驗165.1試驗細胞培養165.2醫療器材生物相容性與安全性實驗165.3陸生念珠藻萃取物對CCD-966SK細胞株之第一型及第三型膠原蛋白合成表現及分泌之影響175.4陸生念珠藻藻萃取物抑制發炎功能之試驗216.統計分析21第四章結果221.陸生念珠藻藻體一般成分分析222.陸生念珠藻萃取物之分析222.1陸生念珠藻萃取物之總醣含量222.2陸生念珠藻萃取物之總酚含量222.3陸生念珠藻萃取物之類黃酮含量222.4陸生念珠藻萃取物之硫酸根含量232.5陸生念珠藻萃取物之單醣分析233.陸生念珠藻及萃取物之金屬離子含量分析234.陸生念珠藻萃取物對細胞生理活性影響234.1陸生念珠藻萃取物對細胞活存率分析234.2陸生念珠藻萃取物對NIH-3T3細胞株之細胞形態影響244.3陸生念珠藻萃取物對CCD-966SK細胞株胞內合成第一型及第三型膠原蛋白之表現254.4陸生念珠藻萃取物對CCD-966SK細胞株胞外分泌第一型及第三型膠原蛋白之影響254.5陸生念珠藻萃取物對RAW264.7細胞株產生Interlukin-6之影響26第五章討論271.陸生念珠藻藻體一般成分分析272.陸生念珠藻萃取物之分析282.1陸生念珠藻萃取物之多醣含量282.2陸生念珠藻萃取物之多酚含量282.3陸生念珠藻萃取物之類黃酮含量292.4陸生念珠藻萃取物之硫酸根含量302.5陸生念珠藻萃取物之單醣分析303.陸生念珠藻及萃取物之金屬離子分析314.陸生念珠藻萃取物對細胞生理活性影響334.1陸生念珠藻萃取物對細胞活存率分析334.2陸生念珠藻萃取物對NIH-3T3細胞株之細胞形態影響344.3陸生念珠藻萃取物對CCD-966SK細胞株胞內合成第一型及第三型膠原蛋白之表現344.4陸生念珠藻萃取物對CCD-966SK細胞株胞外分泌第一型及第三型膠原蛋白之影響354.5陸生念珠藻萃取物對RAW264.7細胞株產生Interlukin-6之影響35第六章結論37第七章參考文獻38
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