純化蛋白質(protein purification) - 小小整理網站Smallcollation

(1) 粗蛋白(crude protein)：採樣→ 均質打破細胞→ 抽出全部蛋白，多用鹽析沉澱法。

(2) 部分純化(partially purified)︰初步的純化，使用各種管柱層析法。

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(2)部分純化(partiallypurified)︰初步的純化，使用各種管柱層析法。

(3)均質蛋白質(homogeneous)︰目標蛋白質的進一步精製純化，可用製備式電泳或HPLC等。

資料來源：國立臺灣大學 二、分離方法(method) 蛋白質純化技術 依大小 透析 超濾 膠體過濾 蔗糖梯度超高速離心 依溶解度 等電點聚焦法 鹽溶、鹽析 依帶電性 離子交換層析法 親和性純化 ---- 高效率層析法 ---- 1.蛋白質大小(Size)差異以分離 A. 透析（Dialysis）： a. 將原溶液置於透析袋，再置於緩衝溶液中，小分子可通過透析袋進入緩衝液，透析袋內的小分子數目會減少，而大分子數目卻不變，重複多次之後就可以把小分子的數目降到很少。

b. 運用：脫鹽(Desalination) B. 超濾(Ultrafiltration)：適用於處理體積較大量的樣本，運用在：濃縮蛋白質、置換緩衝液 C. 膠體過濾（Gelfiltration）：膠体過濾法是一種Partition層析法。

小分子可進入小珠子（beads）的孔洞內，大分子不可進入，因此小分子經過的路徑較長，會停留較久，而大分子經過路徑短，會較快流過。

簡單來說，就是利用時間差以達到分離純化的目的 資料來源：bricker D. 蔗糖梯度超高速離心(Surcosegradientcentrifugation)：依蛋白密度差異而分離，密度越大的蛋白質越接近管底，密度越小的越接近液面。

流程： a. 利用儀器製造蔗糖梯度 b. 在液面緩緩滴入樣品形成薄膜 c. 放入離心機高速離心 d. 最後分裝溶液 資料來源：lyricsdog 2. 利用蛋白質溶解度（Solubility）差異 A. 等電點聚焦法（Isoelectricfocusing,IEF） a. 利用蛋白質等電點的不同來分離蛋白 b. 蛋白在某pH值下電荷為0→此pH質=等電點（pI） c. 將蛋白質置於具有pH梯度的膠體進行電泳，它會朝著與自身所帶電性相反的電極方向移動，直到抵達pI處才停止運動。

此過程蛋白被「聚焦」在等電點的窄帶中 資料來源：維基教科書 B. 鹽溶、鹽析（Saltingin&Saltingout） @鹽溶Salting-in：加鹽使蛋白質溶入水溶液中 @鹽析Salting-out：加鹽使蛋白質由水溶液中沉澱出來 鹽溶（Saltingin） 鹽析（Saltingout） 原理 分子在其等電點時，容易互相吸引，聚合沉澱；加入鹽離子會破壞此吸引力，使分子散開，溶入水中 蛋白質表面的疏水性區域，都聚集許多水分子，當鹽加入時，這些水分子被抽出，以便與鹽離子進行水合，此時暴露出疏水性區域和親水性區域相互結合，形成沉澱 使用鹽離子 氯化鈉NaCl 硫酸銨(NH4)2SO4 濃度 150mM≒0.9％（較低） 40％~70％（較高） 鹽析（Saltingout）圖 資料來源：linjah 鹽溶（Saltingin）&鹽析（Saltingout）比較 資料來源：linjah 3. 離子交換層析法(Chargeionexchangechromatography)：此方法運用蛋白質的pI與環境pH之間的相關性 4. 親和性純化（Affinitypurification） A. 當欲純化蛋白會與一配體（ligand）結合，即可使用此配體來純化目標蛋白 B. 例如：欲純化穀胱甘肽S轉移酶(GlutathioneS-transferase)，將Glutathione固定在beads上，當蛋白溶液通過時，酵素就會結合在beads上，而其餘不相干的蛋白則會流掉 C. 此方法也可以用來純化抗體，抗體可以和抗原結合，將抗原固定在beads上，當抗體流經過後，就會與抗原結合 5. 高效率液體層析法(HPLCHigh-performanceliquidchromatography)：為一高解析度的分離方法 ，須使用一金屬管柱，緊密充填許多小直徑的小珠子，此時將蛋白溶液推進入管柱內。

推入過程會產生極大的回壓，故須使用一高壓的幫浦，若使用玻璃或塑膠管柱則易破掉 標籤： 生物化學(biochemistry), 蛋白質(protein) 以電子郵件傳送這篇文章BlogThis！分享至Twitter分享至Facebook分享到Pinterest 1意見: 匿名2018年1月21日下午3:55整理得太棒了!回覆刪除回覆回覆新增留言載入更多… 訂閱： 張貼留言(Atom) 全站搜尋Searchoursite 文章分類(Category) ●生物化學(Biochemistry)●●胺基酸(Aminoacid)●●●胺基酸應用(Aminoacidapplication)●●蛋白質(Protein)●●酵素(Enzyme)●●醣(Carbohydrate)●●脂肪(Lipid)●●維生素(Vitamin)●●遺傳物質(Geneticmaterial)●●生物發育(Biologicaldevelopment)●●代謝(Metabolism)●●●有機物代謝(Organicmattermetabolism)●●●身體能量(Bodyenergy)●●個體與變化(Bodyandchanges)●●死亡(Death)●●循環(Circulation)●●●血液(Blood)●●●血管(Bloodvessel)●●●心臟(Heart)●●●循環系統檢查(Circulationexam)●●神經(Nerve)●●●神經組織(Nervetissue)●●●訊息傳遞路徑(Neuropathway)●●●腦(Brain)●●●脊髓(Spinecord)●●●自主神經系統(Autonomicnervoussystem)●●●神經傳導(Nerveconduction)●●●感覺(Sensory)●●●記憶(Memory)●●●神經損傷(Nerveinjury)●●●神經診斷工具(Neurologicaldiagnostictool)●●●身心科(MentalHealth)●●●睡眠(Sleep)●●●心理學(Psychology)●●●情緒管理(EmotionsManagement)●●呼吸(Respiration)●●●呼吸系統發育(Respiratorysystemdevelopment)●●●呼吸道(Respiratorytract)●●●呼吸運動(Respiratorymovement)●●●臨床呼吸(Clinicalrepiration)●●消化(Digestion)●●●腸道胚胎學(Intestinalembryology)●●●消化道(Digestivetract)●●生殖(Reproduction)●●●發育(Developraent)●●●懷孕(Pregnancy)●●●生殖器官(Reproductiveorgan)●●●女性生殖週期(Femalereproductivecycle)●●●臨床生殖(Clinicalreproduction)●●●演化論(EvolutionTheory)●●泌尿(Urinary)●●●泌尿系統發育(Urinarysystemdevelopment)●●●泌尿器官(Urinaryorgan)●●●腎臟生理(RenalPhysiology)●●表皮(epidermis)●●●皮膚檢查治療(Skinexamandtreatment)●●骨骼(Skeleton)●●●骨骼各論(Skeletalmonograph)●●●關節(Joint)●●●韌帶(Ligament)●●肌肉(Muscle)●●●骨骼肌(Skeletalmuscle)●●●人體肌肉(Humanmuscle)●●●平滑肌(Smoothmuscle)●●●心肌(Cardiacmuscle)●內分泌(Endocrine)●●腺體(Gland)●●內分泌檢測(Endocrineexam)●●免疫(Immune)●●●感染的控制(Thecontrolofinfection)●●●免疫機制(Immunemechanism)●●●免疫系統(Immunitysystem)●●●周邊免疫(Peripheralimmune)●●●免疫疾病(Immunedisease)●●●發炎與過敏(HypersensitivityandInflammation)●●微生物(Microorganism)●●●細菌(Bacteria)●●●披衣菌(Chlamydia)●●●黴菌(Mold)●●●病毒(Virus)●●●寄生蟲(Parasites)●病理學(Pathology)●●細胞(Cell)●●●細胞間連結(ntercellularjunction)●●組織(Tissue)●生物統計學(Biostatistics)●營養學(Nutrition)●語言(Language)●●德文(German)●●日文(Japanese)●●英文(English)●法律(Law)●●憲法(Constitution)●●行政法(Administrativelaw)●●民法(CivilLaw)●●民事訴訟法(Civilprocedure)●●刑法(Criminallaw)●●刑事訴訟法(CriminalProcedure)●●公司法(CompaniesLaw)●●票據法(NegotiableInstrumentsAct)●●證券交易法(SecuritiesandExchangeAct)●●法學英文(LegalEnglish)●●國際公法(Publicinternationallaw)●地理(Geography)●●空白地圖(Blankmap)●●氣候圖(Climograph)●●GIS地圖(GISmap)●政治學(Politics)●社會學(Sociology)●會計學(Accounting)●●資產(Assets)●●費用(Expenses)●●負債(Liabilities)●●業主權益(Owners'equity)●●收入(Revenue)●航太科技(Aerospace)●物理(physics)●●一般物理(generalphysics)●●X光(Xray)●化學(chemistry)●實驗(Experiment)●●顯微鏡(Microscope)●遊戲(Game)●●交通模擬(Simutrans)●●Superstarracing●●世紀帝國2(AgeofEmpiresII)●站務統計(VisitorStatistics) sideRWD2   總瀏覽量 最近7天瀏覽量 RevolverMap TOP