I9 白光雷射倒立型共軛焦顯微鏡–FLIM系統
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建議使用1.5H (0.17 mm) 蓋玻片; 建議使用Confocal專用玻璃底培養皿; 若須使用STED超高解析圖像擷取,請使用精度高之蓋玻片或玻璃底培養皿; 活細胞長時間培養觀察,可 ...
高階多維度影像分析平台
High-DimensionalAdvancedImagingCoreFacility
I9-白光雷射倒立型共軛焦顯微鏡–FLIM系統
LeicaSP8-gSTED/FLIM(FALCON)
LeicaSP8-gSTED/FLIM(FALCON)
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中文說明
Intro
儀器描述
STED顯微鏡應用壓制雷射形成donut以壓制螢光,產生比共軛焦顯微影像更高解析度的gatedSTED影像,其光學解析力至50nm以下,是為不經運算之純光學超解析技術。
STED技術中,解析度可隨壓制雷射之強度而變化。
壓制雷射強度越強,可達到越高的解析度,搭配LightGate技術移除雜訊,同樣雷射強度下解析度可提升1.4倍。
主要特點
多色高解析度觀察
多點位置應用及樣品大面積拼圖
光譜分析功能
弱螢光影像
螢光共振能量轉移(FRET)
螢光漂白恢復術(FRAP)及光漂白螢光損失(FLIP)實驗
活細胞時間序共軛焦影像
螢光生命週期顯微影像(FLIM)
超解析顯微影像(STED)
儀器規格
電動倒立型顯微鏡:LeicaDMI6000
雷射系統:
■共軛焦系統:405nm,及白光雷射系統WLL470-670nm連續可調
■超解析系統:雙STED壓制雷射系統(Depletionlaser):592nm,775nm
螢光濾片:DAPI,EGFP,TexasRed
物鏡:10x,20xImmCorr甘油鏡,40x油鏡,63x油鏡,93xGlyc(STED)甘油鏡,100x(STED)油鏡
感測器:兩組光電倍增管(PMT)感測器,兩組光譜型高感度偵測器(HyD)
DIC浮雕相位差觀察模式
電動載物台
LightGate偵測技術
3DgSTED模組
活細胞觀察系統:
■方盤密閉式培養盒,加熱控制器,二氧化碳控制器,濕度控制用加熱器
控制軟體:LAS-XSP8
離線分析軟體:LAS-XSP8
使用注意事項
建議使用1.5H(0.17mm)蓋玻片
建議使用Confocal專用玻璃底培養皿
若須使用STED超高解析圖像擷取,請使用精度高之蓋玻片或玻璃底培養皿
活細胞長時間培養觀察,可使用玻璃底培養皿或多孔盤
使用STED功能須避免會受592nm雷射激發之染劑,例如DAPI或HOECHST等(DAPI可使用TO-PRO-3,YOYO-3,DRAQ5替代)
STEDSample製備參考:https://webcdn.leica-microsystems.com/fileadmin/academy/2019/Quick_Guide_STED_Sample_Preparation/STED_Sample_Preparation_Guide_Online_20190705.pdf(超解析顯微技術有其限制,委託上機樣品須符合STED樣品備製需求)
以下功能應用不提供自行操作:
■1.非一般標準玻片型式之樣品,非乾式樣品,具有溶液或細胞培養液樣品。
■2.使用STED模組
■3.Photonmanipulation實驗
放置地點
國家生技研究園區A棟4樓407b室
管理人員
羅麗紋博士
電子信箱:[email protected]
電話:02-7750-5554或02-7750-5556
Description
Nanoscopyhasrevolutionizedthestudyofsubcellulararchitectureanddynamicsandisonitswaytobecomingthenewgoldstandardinfluorescenceimaging(NobelPrizeforChemistry2014).
ThefullyintegratedSTED(STimulatedEmissionDepletion)systemsLeicaTCSSP8STEDmeettherequirementsofdailyresearchandprovidefast,intuitive,andpurelyopticalaccesstostructuraldetailsfarbeyondthediffractionlimit.Resolutionbecomestunableinx,yandz.
Application
Multi-colorhigh-resolutionscanning–LIGHTENING
Fluorescencemultiplepositionandlargeareamergeimaging
Spectrumscan
Low-fluorescenceimaging
FRETexperiment
FRAPandFLIPexperiment
Livingcelltime-lapseconfocalimaging
FLIMscanningandanalysis
STEDsuper-resolutionimaging
Specification
Microscopemainbody:LeicaDMI6000
Lasersystem:
■Confocalsystem:405nm,WLL470-670nm
■Depletionlaser:592nm,775nm
Filter:DAPI,EGFP,TexasRed
Objective:10x,20xImmCorrGlyc,40xoil,63xoil,93xGlyc(STED),100x(STED)oil
detector:2,PMTdetector;1,HyDSMDdetector;1,HyDdetector
DICmodule
Automaticsamplestage
LightGatescanning
3DgSTEDmodule
Livingcellincubationsystem:Stage-topboxincubator,O2andCO2,temperatureandhumilitycontroller
Controlsoftware:LAS-XSP8
OFF-Linesoftware:LAS-XSP8
Precautionsforuser
Recommendtouse“1.5H(0.17mm)”coverslip
Recommendtouseglassbottomdishormicroplate
Recommendtousehigh-gradecoversliporglassbottomdishforSTEDapplication
Somefunctionalapplicationisonlytechnicianoperation:
■1.Non-commonusedslice,Wet-typesamplewhichcontainculturemediumandbuffer
■2.Photonmanipulation
Toavoidthe592nmlaserexcitationdyes,eg.DAPI/Hoechst,byusingSTEDsystem(DAPIreplacementdyes:TO-PRO-3,YOYO-3,DRAQ5)
ReferenceforSTEDsamplepreparation:SuggestionfromLeicawebsite(STEDtechnologyhasthelimitation,andusermustbeunderstoodtherequirementofsamplepreparation)
Facilitylocation
NationalBiotechnologyResearchParkBuildingA,4thFloor,room407b
Manager
Li-WenLo,PhD
E-mail:[email protected]
Tel:02-7750-5554或02-7750-5556
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重要公告
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1.共儀儀器的日間使用時段為9A-5PM,夜間/假日儀器預約與使用規範請看20210805公告
2.超高速離心機已維修完畢,即日起開放儀器預約
3. TissueGnostics病理掃片機目前進入維修狀態,如有需求可電洽專人代掃服務
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